geolike.ru

Токсикозы рыб

Заболевания, причиной которых являются ядовитые вещества различного происхождения, называются отравлениями, или токсикозами.

Этиология.

По происхождению отравления могут быть двух типов:

1) отравления, вызываемые минеральными и синтетическими соединениями, которые попадают в рыбохозяйственный водоём со сточными водами промышленных и сельскохозяйственных предприятий;

2) отравления, вызываемые ядами растительного происхождения, которые выделяются в воду при массовом развитии («цветении») и разложении синезелёных и зелёных водорослей.

Токсикозы рыб возникают вследствие повышенного содержания в воде фосфорорганических соединений (пестицидов), аммиака, сероводорода и других токсических соединений. При отравлении рыб аммиаком для его детоксикации вносят хлорную известь (1—3 г/м³) в течение трех дней. При отравлении пестицидами рекомендуется скармливать премикс, добавляя его в корм в количестве 30 %. В состав премикса входят бентонитовая глина и активированный уголь. С этой целью применяют и цеолит.

Отравления минеральными и синтетическими соединениями могут происходить в любое время года, но чаще проявляются в зимнее время, когда в результате попадания сточных вод в водоёме ухудшается и без того напряженный гидрохимический режим. Число химических соединений, губительно действующих на рыбу, очень велико. Токсическое действие на рыбу оказывают соли тяжёлых металлов, минеральные и кислотные загрязнители, фенольные вещества, нефть и нефтепродукты. Среди ядов органического происхождения особое место занимают вещества, применяемые в сельском хозяйстве для уничтожения насекомых (инсектициды), вредителей сельскохозяйственных культур (пестициды) и сорняков (гербициды) и т. д. Неблагоприятное воздействие может оказывать на рыбу кислая и щелочная среда, показателем которой служит концентрация водородных ионов (рН). Для многих рыб рН 6,0—8,5 является наиболее благоприятной. Различные виды рыб по-разному относятся к изменениям рН. Э. Амляхер указывает следующие летальные значения в щелочной среде: для форели - 9,2. плотвы - 10,4, щуки - 10,7 карпа, линя -10,8.

 При очень высоких или очень низких показателях рН наблюдаются отравления, которые в литературе описаны как «кислотное» и «щелочное» заболевания. Кислотное заболевание наблюдается у рыб при содержании их в кислой среде с рН равной и менее 5. Щелочное заболевание наблюдается у рыб при рН более 9. Устойчивость рыб к ядам зависит от вида, возраста и физиологического состояния их. В. И. Лукьяненко делит рыб на две группы: малоустойчивые — ёрш, налим, чехонь, судак, радужная и ручьевая форель; высокоустойчивые — карась, сом, плотва, лещ, осётр, карп. Устойчивость рыб к ядовитым веществам ослабляется при повышении температуры воды, уменьшении содержания кислорода, повышении рН более 10 или снижении менее 5. Очень чувствительны к отравляющим веществам икра, особенно на стадии гаструляции, мальки в начале малькового периода и неполовозрелые рыбы.

Отравления ядами растительного происхождения обычны в летнее время, иногда осенью, т. е. в период массового развития и отмирания водорослей. В прудовых хозяйствах цветению способствует внесение большого количества минеральных удобрений и концентрированных кормов. В естественных водоёмах - озёрах, водохранилищах - неизбежное увеличение загрязнения в результате попадания сельскохозяйственных стоков оказывает такой же удобрительный эффект, приводящий к цветению воды. Наиболее губительные последствия вызывает массовое развитие таких водорослей, как афанизоменон, микроцистис, анабена, примнезиум и др. Токсины, которые они выделяют, — это алкалоиды, близкие к ядам бледной поганки, токсину ботулизма. Клинические признаки.

Отравления различными веществами могут протекать со сходными клиническими признаками. Наиболее часто при отравлениях изменяется окраска жабр, пигментация кожи. У рыбы отмечают изъязвление кожных покровов, подкожные кровоизлияния, иногда общую водянку тела, прошение чешуи, пучеглазие. В ряде случаев изменяется поведение рыбы. При отравлении ядами местного действия (солями тяжелых металлов, кислотами, щелочами, аммиачными соединениями и т. п.) характерно обильное слизеотделение на жабрах и коже, кровоизлияния и мозаичность жабр, поражение роговицы глаз. Рыбы захватывают воздух. Гибель наступает от удушья. В зависимости от вида яда местного действия к перечисленным общим признакам добавляются характерные для данного случая. При кислотном заболевании рыбы совершают резкие движения, захватывают воздух и выпрыгивают из воды. На жабрах наблюдается коричневатый налёт, иногда некроз, вздутие эпителия и усиленное выделение слизи. На коже видны молочно-белые пятна и покраснения в области брюшка. Рыбы плавают наклонно, часто забиваются в заросли и погибают. При щелочном заболевании вода действует на рыбу как слабая щёлочь, т. е. вызывает ожог эпителия жабр и плавников. Позднее наблюдается помутнение кожи, расслоение плавников.

Щелочная болезнь также может приводить к гибели рыбы. При отравлении ядами общего действия (фенолами, нефтью и нефтепродуктами, сапонинами, цианидами, хлор- и фосфор-органическими соединениями и т. п.) у рыб отмечают потерю равновесия, спиралеобразное плавание, стремление выпрыгнуть из воды. Яды общего действия влияют избирательно на ту или иную систему организма - кровь, цитоплазму клеток, нервную систему, ферментативную деятельность и др., вызывая соответствующие нарушения и гибель рыбы. В зависимости от свойства и концентрации яда и устойчивости рыбы различают острое и хроническое отравление. Острое отравление вызывает массовую гибель рыбы в ближайшие 5-7 суток или раньше. При хроническом отравлении гибель незначительна и может наблюдаться через несколько месяцев после попадания в организм рыбы ядовитого вещества. При длительном воздействии некоторые токсические вещества могут вызывать у рыб старших возрастных групп различные опухоли. Кроме непосредственного действия на рыбу содержание химических веществ в воде влияет на возбудителей заболеваний. Кислая среда (рН менее 6,4) способствует возникновению хилодонеллеза и гиродактилеза у сеголетков карпа в зимовальных прудах. Оспа карпов также чаще наблюдается в прудах с низким значением рН. Щелочная среда (рН 8,5—9,0) замедляет развитие бактерий аэромонас пункта -вторичного этиологического агента краснухи карпа.

Клинические признаки токсикозов рыб

Диагностика токсикозов рыб

Диагностика токсикозов состоит из трех этапов:

1 -обследование рыбы (с целью выявления глубины токсикоза),

2 - исследование корма и определение степени его токсичности,

3 - обнаружение и количественное определение токсического агента.

Обследование рыбы

Алиментарные токсикозы рыб проявляются, в зависимости от дозы и кратности поступления токсиканта, в острой и хронической формах. Высокие дозы токсиканта вызывают острые токсикозы, сопровождающиеся массовой гибелью рыб. При низких дозах интоксикация сопровождается по истечении определенного срока (около 30-40 дней) нарушением обменных процессов, замедлением роста, снижением резистентности и даже гибелью наиболее ослабленных экземпляров рыб.

Острые токсикозы вызываются дозами, значительно превышающими МДУ (максимально допустимые уровни), и приводят к быстрой гибели рыб в течение 1-3 суток. В зависимости от вида токсиканта клинические признаки могут быть самыми разными, но, как правило, поражаются нервная, опорно-двигательная или кроветворная системы.

Хронические токсикозы проявляются поэтапно. Их проявление сходно с симптомами, наблюдаемыми при неполноценном или несбалансированном кормлении. Болезнь имеет несколько стадий развития.

I стадия.

Видимых клинических признаков заболевания не обнаруживается. Отмечают отклонение показателей обмена веществ от нормы, что проявляется в снижении темпа роста, а иногда в форме катарального воспаления кишечника.

II стадия.

Длительное скармливание недоброкачественных кормов приводит к снижению естественной неспецифической резистентности рыб, изменению гематологических показателей, воспалению ануса, различных отделов кишечника и выделению слизистых тяжей вместе с экскрементами.

III стадия.

При длительном потреблении слаботоксичных кормов болезнь приобретает хроническую форму. При внешнем осмотре рыб выявляют дряблость мышц, симптом "острой спины", изменение окраски тела и плавников, язвы и кровоизлияния различной локализации, опухоли. При патологоанатомическом вскрытии отмечают ожирение печени, гидремию почек, увеличение их объема, наличие опухолей, асцит, энтерит. Хронические токсикозы приводят к снижению воспроизводительной функции, появлению физиологически неполноценного потомства, снижению резистентности. В отдельных случаях рыбы могут сохранять нормальные показатели темпа роста.

Для диагностики токсикозов исследованию подвергают по 10 рыб из каждой группы. Рыбы исследуемой группы считаются больными, если выявлено не менее 20 % рыб с нарушением обмена веществ. Диагноз устанавливают по среднегрупповым значениям показателей в выборке, а по индивидуальным - с учетом симптоматики заболевших рыб.

Для диагностики стадии течения токсикозов используют различные физиолого-биохимические методы. Для выявления нарушений используют не менее 5-10 физиолого-биохимических показателей (белок, остаточный азот, азот аминокислот, мочевина, липиды, холестерин, глюкоза, мочевая кислота, аспартатаминотрансфераза, холинэстераза сыворотки крови и др.).

Исследование корма.

Качество кормов оценивают на общую токсичность по выживаемости тест-объектов. При выявлении их токсичности специальными методами определяют наличие в них окисленных жиров, микотоксинов, тяжелых металлов, пестицидов и других загрязнителей (.

Максимально допустимые уровни (МДУ) содержания патогенных факторов в комбикормах

Для карпа (от сеголетков до товарной рыбы) МДУ на продукты окисленных жиров разработаны для хозяйств с низкой естественной кормовой базой. Для всех возрастов карпа недопустимо превышение:

- кислотного числа: 50 мг КОН в 1 г жира;

- перекисного числа: 1,0 % йода;

- альдегидного числа: 1,0 Е г/100 мл/см (в единицах оптической плотности). МДУ микотоксинов:

- Т-2-токсин: 0,05 мг/кг корма,

- ДОН-токсин: 3,33 мг/кг корма.

Суммарное содержание продуктов микробиосинтеза: паприна (БВК, дрожжи на нефтепарафинах), гаприна (БВК, дрожжи на природном газе), гиприна (гидролизные, кормовые дрожжи) - 5 % массы корма,

Для лососевых рыбМДУ на афлатоксины не разработаны

- радужная форель наиболее чувствительна к афлатоксинам;

- афлатоксин B1 (0,03 - 0,06 мг/кг корма) вызывает массовую гибель мальков;

- концентрации 0,5-1,0 мг/кг корма вызывают образование опухоли печени;

- афлатоксины В2, G1 и G2 встречаются в кормах реже и в меньших концентрациях, чем афлатоксин В1 они также уступают ему в токсичности и канцерогенности; МДУ на госсипол для рыб не разработаны

- доза 0,1 г/кг - вызывает изменения гематологических показателей и нарушает процесс синтеза белка; доза 0,3 г госсипола на 1 кг корма подавляет рост рыб.

Определение токсичности фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов с использованием рыб-гуппи. При санитарной оценке концентрированных кормов их необходимо исследовать на токсичность, которая может быть обусловлена за счет наличия в кормах химических соединений и микотоксинов. Для этой цели в соответствии с ГОСТ отбирают средние пробы кормов и отправляют в лабораторию на исследование, при котором определяют общую токсичность и присутствие микотоксинов.

Определение общей токсичности.

Исследования проводят по Методике, утвержденной ГУВ МСХ России. Принцип методики основан на извлечении из фуражного зерна, продуктов его переработки, комбикормов ацетоном жиро- и водорастворимых фракций токсических веществ и последующем воздействии этих фракций на аквариумных рыб - гуппи.

Методика позволяет определить токсичность концентрированных кормов в течение суток без учета времени подготовки образцов для тестирования.

Пробу фуражного зерна (ячмень, овес, пшеница, горох, кукуруза, просо) 50 г тщательно измельчают на лабораторной мельнице (отруби и комбикорма экстрагируют без измельчения), помещают в плоскодонную колбу с притертой пробкой, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют при встряхивании на шуттель-аппарате в течение двух часов.

Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в фарфоровую чашу и выпаривают под тягой на водяной бане (Т 55-60°) досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и переносят его в химический стакан (емкостью 700-800 мл, диаметром 11-15 см) с 500 мл воды из аквариума комнатной температуры (17-20°). Экстракты из комбикормов, кукурузы, гороха и проса после растворения в воде помещают в бытовой холодильник на 40-45 мин. при Т 6-7°С, по истечении срока экстракты фильтруют через небольшой слой ваты, подогревают до исходной температуры (17-20°).

В воду с экстрактом помещают 5 рыб-гуппи независимо от пола, возраста, за которыми ведут наблюдение, отмечая их гибель через 24 часа (гуппи, вышедшие из опыта, выбраковываются).

Примечание. Если фуражное зерно, продукты его переработки и комбикорм окажутся токсичными, такие партии кормов немедленно исключаются из рациона и проводят дополнительные дифференциальные исследования на хлор- и фосфорорганические соединения, препараты ртути, алкалоиды (по ранее разработанным методикам) и микотоксины.

Определение микотоксинов

Методика основана на извлечении микотоксинов из фуражного зерна, продуктов его переработки комбикормов, частичной очистки экстракта гексаном от липидов и некоторых неполярных хлор- и фосфорорганических соединений с последующей переэкстракцией микотоксинов хлороформом и исследованием на рыбах-гуппи. Методика позволяет определить токсичность в течение 24-30 часов.

Пробу фуражного зерна 50 г тщательно измельчают на лабораторной мельнице (отруби и комбикорма экстрагируют без измельчения), помещают в плоскодонную колбу с притертой пробкой, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют при встряхивании на шуттель-аппарате в течение двух часов или в статическом состоянии - 20 часов. Экстракт фильтруют через бумажный обеззоленный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают под тягой на водяной бане (55-60°) до объема 45-50 мл.

Остаток переносят в делительную воронку, в которую добавляют 10 мл воды. Содержимое чашки смывают 5 мл ацетона, сливают в делительную воронку и встряхивают одну минуту. Затем в воронку вносят 50 мл гексана и встряхивают 1-2 минуты. После разделения слоев - нижний сливают в другую делительную воронку и дважды экстрагируют 40 мл хлороформа (в каждом случае встряхивают две минуты). Гексановую фракцию, при необходимости, исследуют на хлор и фосфорорганическое соединения. После разделения слоев хлороформные фракции (нижний слой) сливают в фарфоровую чашку и упаривают под тягой на водяной бане (55-60°) до исчезновения хлороформа (досуха). Сухой остаток растворяется 5 мл ацетона и переносят его в химический стакан с 500 мл воды (17-20°), взятой из аквариума. В раствор экстракта помещают пять гуппи независимо от пола и возраста, за которыми ведут наблюдение, отмечая их гибель через 24 часа. Для повышения биологической достоверности результатов численность тест-организмов необходимо увеличить до 10 штук, то есть проводить биоанализ в двух повторностях.

Определение токсичности кормов с использованием инфузории Тетрахимена пириформис. Работу проводят следующим образом. Взятые на анализ пробы кормов тщательно перемешивают и растирают в ступке. Берут ряд навесок (не меньше 3 - 5) в количествах, обратно пропорциональных предполагаемой токсичности, но не более 300 мг в наибольшей по массе навеске. Их вносят в пробирки или флаконы и заливают по 2 мл чистой кипяченой воды, закрывают резиновыми пробками с вырезкой для доступа воздуха, что предотвращает выбрасывание пробок при нагревании флаконов. Прогревают в водяной бане (или стерилизаторе) 15-20 мин. при температуре 80-90°С. После охлаждения до комнатной температуры во флаконы вносят по 0,05 мл культуры Тетрахимены пириформис, разведенной перед этим водой в 10 раз, и ставят в термостат при +25°С или в обычный шкаф в затемненное место при комнатной температуре на 1—4 суток.

Наличие роста, его степень контролируют каждые сутки под микроскопом (МБС - микробиологический стереоскопический) при увеличении 2х8. Это позволяет просматривать пробы прямо в пробирке или флакончике, не беря их пипеткой, что является предварительным контролем, за которым следует просмотр в капле под МБИ (увеличение 7х90). Каплю берут на предметное стекло пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой, просматривают весь объем, все слои. Контролем является водопроводная, дехлорированная путем кипячения вода, в которую одновременно с опытом также засевают культуру инфузорий.

Угнетение подвижности, наличие гибели, даже единичных особей или их деформации свидетельствует о токсичности или другой вредности исследуемого материала. Определенную вредность продукта характеризует замедление роста и размножения инфузорий. Для этого на 4-е сутки производят количественный учет выросших особей в счетной камере Фукс-Розенталя или Горяева, но чаще всего ограничиваются примерным учетом погибших особей путем просмотра капли среды в трехкратной повторности, наличием каких-либо отклонений в подвижности и внешним виде инфузорий.

Целесообразно делать и подсчет выросших особей. Для этого во все флаконы вносят по 3 мл фиксирующего раствора, например, формалина, приготовленного по следующей прописи: 20 мл 33% формалина, 175 мг КН2Р04, 170 мг К2НР04 и 440 мл дистиллированной воды. Количество инфузорий в каждом флаконе, соответствующем разведению (титру) корма, выражают в процентном отношении к контролю (засеянному на стандартную среду, разведенную водой в 10 раз) и выдержанному в то же самое время, что и опыт. На основании полученных цифр проводят соответствующие расчеты угнетения роста и гибели по правилам общей токсикологии. При необходимости используют и полулогарифмическую сетку пробит-анализа.

Кроме того, пробы, не показавшие гибели или других патологических изменений Тэтрахимены в течение 1-4 суток, оставляют на дальнейшую инкубацию до 7 суток для выявления возможной кумуляции, т.е. накопления токсического эффекта, характеризующегося замедлением развития, частичной гибелью и другими изменениями жизнедеятельности данного тест-объекта. Их наличие также выражают в баллах или в процентах от количества особей в опыте и по отношению к контролю.

Культурная стандартная среда для тетрахимены пириформис: 2 г пептона бактериологического; 0,5 г глюкозы; 0,1 г дрожжевого экстракта; 0,1 г морской соли аптечной (или 0,1 г NaCI) на 100 мл дистиллированной воды. Среду подвергают автоклавированию при 0,5 атм. 30 мин. или в кипящей водяной бане 1 час. Хранят в темном месте, т.к. на свету питательные компоненты разлагаются. Слой среды не должен превышать 1,5-2 см. Культуру поддерживают путем пересева каждые 7-10 суток на новую среду.

Экспресс-метод определения общей токсичности фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов с использованием инфузорий стилонихий.

Экспресс-метод основан на качественном и количественном определении реакции инфузорий стилонихий на действие различных фракций токсических веществ (бактериальной, грибковой и химической природы), извлекаемых ацетоном из исследуемого продукта, совместно с действием мелкодисперсной взвеси продукта, находящейся в его водно-ацетоновом растворе. Токсический эффект оценивается через 1 час, при этом одновременно проводятся качественный и количественный анализ. В первую очередь осуществляется качественный анализ. Визуально, с помощью микроскопа МБС-10 (увеличение 2х8), оценивается подвижность инфузорий во всех тестируемых пробах (комбикорма или их компоненты). При отсутствии токсичности инфузории подвижны. В токсичных пробах инфузории неподвижны. Далее проводят количественный анализ в пробах с неподвижными инфузориями. В этом случае токсический эффект оценивается по проценту гибели инфузорий, который пропорционален степени токсичности продукта. Погибшие организмы полностью распадаются (лизируются), что облегчает количественный подсчет выживших организмов.

Определение общей токсичности на инфузориях стилонихиях визуальным методом.

Необходимое оборудование и материал

Для осуществления метода экспрессного биотестирования требуется следующее оборудование:

1. Микроскоп бинокулярный стереоскопический.

2. Весы лабораторные 4 класса.

3. Мельница электрическая лабораторная.

4. Шкаф сушильный.

5. Планшетка с 50 лунками 1шт.

6. Колбы конические для экстракции емкостью 100мл - 15шт. 7-Химические стаканы емкостью

100мл - 15шт.

8. Шприц многоразовый с дел. на 0.5мл-1шт.

9. Пипетки мерные Мора на 25мл, 20мл и 15мл - по 1шт.

10. Цилиндр мерный на 100 мл - 1 шт.

11. Часы песочные на 2 мин.- 1шт.

12. Пипетки для пересадки инфузорий - 50шт.

13. Чашки Петри - 30шт.

14. Дрожжи пекарские прессованные (ГОСТ 171-81) - 50г.

15. Бумага фильтровальная.

16. Карандаш по стеклу.

17. Ацетон марки ЧДА, ОСЧ - 1,5л на 100 анализов

18. Спирт этиловый 1,75л на 100 анализов + 100мл на каждые 100 пересевов культуры.

19. Сито с ячеёй 0,5мм.

Подготовка пробы к биотестированию

Пробу кормовой муки, сырья и комбикормов в количестве немногим более 10г (1 столовая ложка) измельчают на лабораторной электрической мельнице в течение 1-2х минут и просеивают через сито с ячеёй 0,5 мм. Навеску пробы (10г) помещают в стеклянную посуду для экстракции емкостью 100 мл с притертой пробкой (можно использовать баночки из-под детского питания на 100 г с крышкой), заливают 15мл ацетона и экстрагируют при энергичном встряхивании в течении 2-х минут. Экстракту дают отстояться в течение 10 минут, после чего прозрачный надосадочный экстракт в количестве 0,5мл осторожно отбирают шприцем и переносят в химический стакан со средой для культивирования инфузорий.

Приготовленные водные растворы ацетоновых экстрактов мясокостной и рыбной муки, дрожжей гидролизных, БВК, и жиросодержащих продуктов (кукуруза, шроты) перед проведением биотестирования необходимо профильтровать через слой фильтровальной бумаги.

Меры борьбы.

Для предупреждения отравления сточными промышленными и сельскохозяйственными водами рекомендуется вдоль береговой зоны водоёмов (особенно головных водохранилищ) создавать заросли камыша озёрного, узколистого рогоза и хвощей. Особенно активно поглощает фенолы и нефтепродукты камыш. В таких водоёмах выравнивается рН, снижается окисляемость, повышается содержание кислорода. Для улучшения санитарной обстановки и устранения возможности загрязнения прудов предлагается устраивать перед водоподачей «ботанические площадки - ряд параллельных канав (600—800 м), засаженных водной и земноводной растительностью, которая способствует очистке подаваемой в пруды воды от многих вредных примесей. Для предотвращения кислотной болезни в пруды с низкими значениями рН вносят негашеную известь. При щелочной болезни необходимо устранять сильную зарастаемость прудов. При отравлениях ядами растительного происхождения, образовавшимися при цветении воды, рекомендуется прекратить удобрение прудов и кормление рыбы для уменьшения загрязнения. В воду вносится хлорная известь из расчета 1—10 г/м? 1-3 раза в зависимости от степени развития водорослей и поражения рыбы или негашеная известь из расчёта до 100 кг/га. Кроме того, рекомендуется внесение медного купороса из расчёта 8—12 кг/га 1 раз в месяц. Очистке воды при массовом развитии водорослей способствует обработка водоёма монуроном в концентрации 1-2 мг/л. Если есть возможность, рекомендуется смена воды в пруду.